技術(shù)文章
生物樣本是醫(yī)學(xué)研究的重要資源,其質(zhì)量在很大程度上決定著臨床結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。目前生物樣本及其提取產(chǎn)物主要有深低溫和常溫兩大類保存方式,針對(duì)不同科研的需求,更多的樣本保存方式也相繼問世,本文將對(duì)常用的樣本保存方式及運(yùn)輸條件進(jìn)行小結(jié),可以收藏保存?zhèn)溆谩?/span>
樣本儲(chǔ)存條件
1. -196℃、-150℃ 深低溫凍存
超低溫凍存是理想的樣本保存方法,目前液氮(-196℃)是靠譜的樣本保存方法,然而由于樣本浸沒在液氮中,游離的組織碎片可能帶來交叉污染的潛在風(fēng)險(xiǎn),因此催生了氣相液氮(-150℃)的保存方式,就是將樣本置于液氮以上、氣相液氮的包圍之中,可以很好地避免交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)。另外,也可以通過電力冰箱制冷達(dá)到-150℃的低溫效果,從而能滿足樣本的長(zhǎng)期保存需求。因?yàn)?137℃是水玻璃化溫度,低于此溫度時(shí)細(xì)胞內(nèi)能導(dǎo)致內(nèi)容物降解的一切生化反應(yīng)均處于失活狀態(tài),從而能達(dá)到長(zhǎng)期保存的要求。
2. -80℃
-80度低溫保存是凍存核酸較為理想的樣本保存方法:在不具有液氮保存條件的生物樣本庫(kù),也可以考慮使用-80℃深低溫冰箱來保存組織樣本。有研究表明,在-80℃條件下,DNA產(chǎn)量、完整性以及RNA產(chǎn)量可以維持長(zhǎng)達(dá)7年不發(fā)生明顯改變,但是RNA完整性在凍存5年后開始下降。因此建議保存組織時(shí)候進(jìn)行分裝,再加入RNA特異性穩(wěn)定劑后凍存于-80℃,更有利于組織內(nèi)RNA的保存。
關(guān)于蛋白質(zhì)的保存,目前也以深低溫凍存為主,可以很好地保護(hù)其穩(wěn)定性。短期儲(chǔ)存也可以保存在-20°C的低溫冰箱中。
3. 常溫保存:鑒于深低溫凍存的運(yùn)輸與操作的不便性,常溫保存的方法應(yīng)運(yùn)而生。常溫保存技術(shù)的原理可類比線蟲的脫水休眠現(xiàn)象,利用某些特殊技術(shù)或容器將脫水干燥后的樣本置于密閉環(huán)境中,或者向生物樣本中添加保護(hù)劑,使相關(guān)酶失活,從而達(dá)到常溫環(huán)境下保護(hù)樣本的目的。
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